l'enzyme de Taq de Chaud-commencement est très utilisée. Comparé à l'ADN polymérase ordinaire, l'enzyme de Taq de chaud-commencement peut effectivement éviter une certaine amplification non spécifique et la formation des dimères d'amorce, et peut effectivement améliorer l'indice de réussite de l'amplification de gène de cible. Particulièrement dans le domaine du dépistage génétique, l'enzyme de Taq de chaud-commencement a été identifiée comme norme obligatoire dans l'industrie, et l'ADN polymérase ordinaire ne devrait pas être employé. Aussi peut être vu le d'après ce qui précède, enzymes de Taq de chaud-commencement sont très utilisés. Actuellement, il y a beaucoup de marques des enzymes de Taq de chaud-commencement sur le marché intérieur, mais il n'y a pas beaucoup d'enzymes de Taq de chaud-commencement avec de haute qualité. Confronté à tant de produits d'enzymes de Taq de chaud-commencement, comment devrions-nous choisir ?
1. Choisissez l'enzyme de Taq de chaud-commencement avec l'efficacité élevée d'amplification
L'efficacité d'amplification d'ACP est étroitement liée à la représentation de l'enzyme de Taq. Après bonne réaction enzymique de Taq un système est optimisé, l'efficacité d'amplification est au-dessus de 95%, et la gamme d'amplification de la quantité initiale de calibre est large. L'amplification satisfaisante peut être obtenue quand le contenu de gène de cible est bas, et il n'est pas facile d'être empoisonné quand le montant de calibre est élevé, et la période exponentielle d'amplification est longue. Pour l'enzyme de Taq avec la dégradation des performances, même si le système de réaction a été optimisé pendant beaucoup de fois, l'efficacité d'amplification est encore moins de 90%, la forme de « S » de la courbe d'amplification n'est pas évidente, la pente est petite, et la courbe est plate. Quand la quantité de calibre est basse, elle ne peut pas être amplifiée, et quand la quantité de calibre est haute, l'effet d'amplification n'est pas idéal. Par conséquent, la sélection des ADN polymérases avec l'efficacité élevée d'amplification est cruciale au succès de l'ACP et du qPCR.
2. Enzyme choisie de Taq de chaud-commencement avec la puissance forte d'enzymes
La puissance enzymatique de l'enzyme de Taq est liée à l'efficacité d'amplification. Généralement, plus la puissance enzymatique de l'enzyme de Taq de chaud-commencement est forte, plus la période de croissance exponentielle de l'amplification d'ACP est longue, plus typique la courbe “en forme de s”, plus la valeur de signal de fluorescence est haute, et le plus approprié pour la détection multiplex d'ACP. Les ADN polymérases de marque avec la puissance enzymatique faible peuvent généralement seulement soutenir 2 réactions de plex. En faire 3 réactions de plex, la courbe d'amplification est basse, la valeur de signal de fluorescence est basse, et il n'y a aucune courbe typique d'amplification, ainsi il est difficile juger les résultats.
3. Choisissez une enzyme de Taq de chaud-commencement avec la sensibilité élevée
D'une façon générale, l'ADN polymérase a l'efficacité élevée d'amplification et la sensibilité élevée, mais il y a également des contradictions. Si l'abondance de gène de cible de l'échantillon à amplifier est basse, on lui recommande d'examiner la sensibilité d'amplification de l'enzyme de Taq. La méthode de dépistage la plus commune est d'effectuer la dilution de 10 fois ou de 5 fois de gradient du fragment de plasmide de gène de cible, effectue la détection d'ACP à la dilution inférieure, et choisit l'enzyme de Taq de chaud-commencement avec une sensibilité plus élevée de détection.
Il peut voir le d'après ce qui précède que les chercheurs doivent choisir selon leurs propres conditions expérimentales et conditions de financement. Il est le meilleur de faire une expérience d'amplification de dilution de gradient pour détecter l'efficacité d'amplification et la sensibilité de l'enzyme de Taq de chaud-commencement.
Un exemple de l'ADN polymérase de Taq de Foregene :
ADN polymérase de Foreasy HS Taq
Description
L'ADN polymérase de Foreasy HS Taq est un ADN polymérase a exprimé en Escherichia coli machinant des bactéries par technologie de recombinaison de gène. L'enzyme est combinée avec un buffffer unique de réaction, qui rend le produit de haute résistance et compatible, et peut directement employer le lysate témoin (système de lysis de Foregene) comme calibre pour des réactions de détection.
Application
ACP qualitatif et détection quantitative d'ACP des calibres purifified et des calibres non-purifified.
Contrôle de qualité
1. Aucune activité exogène de nucléase n'a détecté
Méthode 2.PCR pour détecter l'ADN genomic résiduelle sans centre serveur
3.It peut effffectively amplifier des gènes de simple-copie dans le génome humain
4.Store à la température ambiante pendant une semaine, changements noobvious d'activité
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