COMMENT AMÉLIORER L'EFFICACITÉ DE LA TRANSCRIPTION D'INVERSE DE LNCRNA ?

Avance

Le long ARN de non-codage, lncRNA est un ARN de non-codage avec des plus grands que 200 nucléotides d'une longueur, généralement entre NT 200-100000. le lncRNA règle l'expression du gène à épigénétique, transcription et niveaux courrier-transcriptional, et participe au chromosome X faisant taire, génome imprimant et la modification de chromatine, l'activation de transcription, l'interférence de transcription, le transport nucléaire, le règlement de cycle cellulaire, le règlement de différenciation cellulaire, et les effets de compensation de dose (effet de compensation de dosage) et beaucoup d'autres processus réglementaires importants sont étroitement liés à l'occurrence, au développement et à la prévention des maladies humaines, et sont actuellement l'un des points chauds dans le domaine de la biomédecine.

01 types et caractéristiques de LncRNA

le lncRNA est divisé en beaucoup de types selon les différentes sources de sa formation, suivant les indications de la figure ci-dessus. A les caractéristiques suivantes :

1. les lncRNAs sont habituellement plus longs, avec l'expression dynamique et les différentes méthodes de épissure pendant la différenciation
2. comparé à coder des gènes, le lncRNA a habituellement un niveau plus bas d'expression
3. La plupart des lncRNAs ont la spécificité temporelle et spatiale évidente d'expression en cours de différenciation et développement de tissu
4. Il y a des expressions caractéristiques dans les tumeurs et d'autres maladies
5. Les emplacements sous-cellulaires du lncRNA sont divers
6. L'ordre est bas dans la conservation, mais la fonction a un certain degré de conservation, etc.

02 questions fréquemment posées au sujet de transcription d'inverse de LncRNA

En raison du bas contenu du lncRNA en cellules, longue longueur et structure de haut niveau, un tel ARN a souvent les structures complexes telles que des boucles ou des épingles à cheveux de tige, et la droite-qPCR est à problèmes enclins de transcription inverse infructueuse ou de basse efficacité.

Solution de transcription d'inverse de 03 LncRNA

Dans la règle centrale, le processus des virus d'ARN utilisant leur propre transcriptase inverse pour synthétiser l'ADN utilisant l'ARN comme un calibre s'appelle la transcription inverse. Le processus d'employer le transcriptase inverse de virus d'ARN pour synthétiser le calibre de cDNA in vitro s'appelle la transcription inverse. Les éléments principaux ont inclus dans le système inverse de transcription : Calibre d'ARN, transcriptase inverse, amorces et d'autres composants.

Calibre 1.RNA

L'influence du calibre d'ARN sur la transcription inverse est reflétée dans sa structure, pureté et intégrité. Plus la pureté et l'intégrité de l'ARN extrait est hautes, plus l'efficacité de la transcription inverse est haute et plus les résultats quantitatifs suivants sont précise. L'ARN purifié par les réactifs utilisés généralement d'extraction d'ARN contient souvent des résidus des sels d'alcool et de guanidine, qui exercent un effet inhibiteur fort sur la plupart de transcriptase inverse.

transcriptase 2.Reverse

Le transcriptase inverse a une influence principale dans le système inverse entier de transcription. La température appropriée pour le transcriptase inverse utilisé dans la plupart des laboratoires est généralement 42°C. en fait, l'ouverture de la structure de haut niveau d'ARN exige une température plus élevée, et les conditions pour le transcriptase inverse sont plus hautes.

3.Primer

Les amorces inverses de transcription incluent les amorces gène-spécifiques, les amorces aléatoires et les amorces Oligo de décollement. La plupart des lncRNAs ne contiennent pas des queues polyA, et il est important d'assortir correctement les amorces aléatoires avec le décollement Oligo.

composants 4.Other

Étant donné qu'il est particulièrement facile dégrader ARN, l'introduction des composants dans le système inverse de transcription peut être réduite au minimum, qui peut effectivement empêcher l'entrée de la RNase et assurer le progrès sans heurt de la transcription inverse.

Foregene obtient à partir du calibre d'ARN, transcription inverse au qPCR escortent largement votre détection de lncRNA

Kit total animal d'isolement d'ARN (avec la colonne d'enlèvement de gDNA)

Kit total d'isolement d'ARN de cellules (avec la colonne d'enlèvement de gDNA)

Lnc-droite HeroTM I (avec gDNase) (prémélange superbe pour la synthèse de cDNA de premier-brin du lncRNA)

Vert en temps réel I d'ACP EasyTM-SYBR

Avantages d'extraction d'ARN :

Le kit emploie la technologie troisième génération d'extraction d'ARN, aucun besoin d'employer la DNase.

11 minutes du plat 96, 24, 12, et 6 bon ont cultivé les cellules, extraction à haute efficacité de l'ARN total sans gDNA, de grande pureté, de haute qualité de cellules.

Avantages de transcription inverse de lncRNA :

Un système inverse de transcription particulièrement développé pour que LncRNA enlève rapidement la contamination genomic d'ADN.

Le système inverse de transcription a la stabilité thermique élevée et a toujours la bonne représentation inverse de transcription à 50°C.

Des calibres avec le contenu élevé de CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE et la structure secondaire complexe peuvent être renversés avec le rendement élevé.

Avantages de qPCR :

La polymérase de Foregene Taq de début chaud a une efficacité plus élevée d'amplification, une sensibilité plus élevée d'amplification, et une spécificité plus élevée d'amplification.

Le vrai mélange facile optimisé d'ACP fait le vert de SYBR que j'ai une sensibilité plus élevée de détection, et son intensité de fluorescence est 3-5 fois qui des produits semblables, qui peuvent répondre aux besoins de différents types d'expériences quantitatives de fluorescence.