Kits principaux RT-PCR EasyTM I de mélange de l'étape RT-PCR de FOREGENE un pour la réaction de QPCR

Kits principaux en une étape RT-PCR EasyTM I (une étape) de mélange de FOREGENE RT-PCR pour la réaction de qPCR

RT-PCR EasyTM I (une étape)

Cat.No.RT - 02011/02012

Mélange principal en une étape de RT-PCR

Pour l'usage de recherches seulement

Magasin à -20℃

Lancement de produit

Les produits en une étape de série de Foregene RT-PCR EasyTM réalisent que la réaction intégrée de l'ARN à l'ADN bicaténaire, c.-à-d., renversent la transcription et amplification d'ACP sont accomplis dans le même tube à centrifuger de réaction et le même système de réaction, qui simplifie les étapes expérimentales, optimise le programme expérimental, et améliore l'efficacité d'expérience.

RT-PCR EasyTM I (une étape) est un kit en une étape de RT-PCR particulièrement développé par Foregene, qui réalise le fonctionnement continu de la droite à l'ACP dans le même tube. L'opération est simple et rapide, qui peut effectivement réduire la pollution pendant l'expérience. Le mélange de 2×RT-PCR EasyTM a la tolérance forte, la stabilité thermique, le rendement élevé et la spécificité pour l'amplification.

Caractéristiques

Le kit en une étape permet la transcription inverse et l'ACP à effectuer dans le même tube. Il doit seulement ajouter l'ARN de calibre, les amorces spécifiques d'ACP et le ddH2O sans RNase.

L'analyse quantitative en temps réel de l'ARN peut être effectuée rapidement et exactement.

Le kit emploie un ADN polymérase unique de réactif de transcription d'inverse de Foregene et de Foregene HotStar Taq combiné avec un système de réaction unique pour améliorer effectivement l'efficacité d'amplification et la spécificité de la réaction.

Le système de réaction optimisé fait la réaction ont une sensibilité plus élevée de détection, une stabilité thermique plus forte, et une meilleure tolérance.

Kit Contents

Conditions de transport et de stockage

états 1.Transportation

Le processus entier du transport à basse température de glacière, pour s'assurer que le kit est dans un état de <4>

2. Conditions de stockage

Droite EasyTM j'est stocké à -20°C. stocke le produit dans un réfrigérateur de la température constante à -20°C juste après le reçu. Si les conditions de stockage sont appropriées, le produit ne dégradera aucune représentation au cours de la période d'une année de validité.

L'information composante de kit

Mélange de 2× RT-PCR EasyTM : Inverse Transcriptase de Foregene, ADN polymérase d'inhibiteur de RNase, de Foregene HotStar Taq, dNTPs, Mg2+, tampon de réaction, optimiseur et stabilisateur, etc.

Précautions : (Lisez svp les précautions soigneusement avant d'employer le kit)

Pour des calibres, on lui recommande d'employer l'ARN extrait à partir des échantillons frais ou stocké à -80℃ (l'ARN devrait éviter la congélation répétée et le dégel).

Afin d'éviter la contamination de RNase, l'opération d'expérience devrait être effectuée dans l'espace sans RNase ; les astuces de pipette et des tubes à centrifuger d'ACP utilisés doivent être sans RNase ; et des gants jetables et les masques devraient être portés. Avant emploi, mettez le mélange de 2×RT-PCR EasyTM sur la glace complètement à la fonte, à la chiquenaude et au mélange bien avant l'utilisation ; la préparation du système devrait être actionnée sur un bain de glace pour améliorer la représentation du kit et la spécificité de l'amplification d'ACP.

Concentration en ARN de calibre

RT-PCR EasyTM I (une étape) : (système)/20μl d'ARN de total 0.1pg-1μg

Guide d'opération

: Préparation des matériaux et des réactifs

1. Préparez le calibre préparé d'ARN (on lui recommande d'employer des kits de série de kit d'isolement d'ARN de total de Foregene pour extraire et purifier l'ARN), les amorces spécifiques (10μM) et les consommables et les instruments relatifs.

Note : Veuillez assurer l'intégrité de l'ARN et essayez d'employer l'ARN extrait à partir des échantillons frais.

2. Le mélange de l'endroit 2× RT-PCR EasyTM et les ddH2O sans RNase sur un bain de glace pour le laisser fondre naturellement, et effleurent le mur de tube pour se mélanger bien pour une utilisation ultérieure.

B : Préparation de système de RT-PCR

Il est commode et rapide employer mélange de 2×RT-PCR EasyTM, évitant la pollution lors du fonctionnement et les erreurs expérimentales provoquées par les préparations multiples du système de réaction dans la plus large mesure possible. En utilisant, seulement la moitié du volume du système de réaction (par exemple, si le système de réaction est 20μl, solution de mélange de prise 10μl 2×RT-PCR EasyTM), ajoutent la quantité appropriée de calibre d'ARN et d'amorces spécifiques, et ajoutent ddH2O sans RNase pour composer le volume. Référez-vous au tableau 1 ci-dessous pour la préparation spécifique de système de réaction de RT-PCR.

Forme 1 : Préparation de système de RT-PCR

1* : Habituellement la concentration finale de l'amorce est 0.2-0.25μM pour obtenir de meilleurs résultats. Quand la performance de réaction est pauvre, la concentration en amorce peut être ajustée dans la marge de 0.1-0.5μM.

Note : L'amorce en avant et l'amorce inverse sont les amorces spécifiques pour le gène de cible ; le système 50μl, se rapportent svp au système 20μl pour ajuster le dosage de réactif proportionnellement.

C : Établissement de programme de réaction de RT-PCR

• Après avoir préparé le système de RT-PCR référence étant faite à la table ci-dessus, mélange doucement (vous pouvez employer l'astuce de pipette pour souffler doucement ; vous pouvez également vous mélanger sur un vortexer et une centrifugeuse brièvement pour rassembler le liquide dispersé sur le mur de tube ou le chapeau de tube, et un endroit sur la glacière pour une utilisation ultérieure).

2. Référez-vous aux arrangements de programme de réaction de RT-PCR (tableau 2) pour placer la température et le temps de la réaction.

Note : Afin d'assurer l'activité du mélange de 2×RT-PCR EasyTM et améliorer son efficacité d'amplification, il est le meilleur de préparer le système de réaction de RT-PCR après établissement du programme d'instrument d'ACP, de sorte que le programme de réaction puisse être suivi juste après que le système est préparé.

Forme 2 : Arrangement de système de réaction de RT-PCR

Note : La procédure ci-dessus est pour la référence seulement. Les conditions réels de réaction varient selon les conditions structurelles du calibre, des amorces, etc. Pour des calibres d'ARN avec les structures secondaires complexes, la température de réaction pour la première étape de la transcription inverse est recommandée pour être 50°C. Dans l'opération spécifique, il est nécessaire de concevoir les conditions optimales de réaction, y compris la température de recuit, temps d'extension, etc. selon les conditions spécifiques de la taille de fragment de cible, la séquence de bases du fragment amplifié, et la teneur en CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE et la longueur de l'amorce.
Diagramme d'opération de RT-PCR