L'étape SYBR de RT-QPCR EasyTM I un me verdissent accomplissent la détection quantitative des gènes pour la droite et l'ACP en temps réel

RT-QPCR EasyTM I (une étape) - vert de SYBR j'accomplis rapidement la détection quantitative des gènes pour la droite et l'ACP en temps réel

Droite-qPCR EasyTM (une étape) - vert I de SYBR

Cat.No.RT - 02111/02112

Mélange principal en temps réel en une étape de RT-PCR

Pour l'usage de recherches seulement

Magasin à -20℃

Lancement de produit

Droite-qPCR EasyTM (une étape) - vert Iuses de SYBR un système unique pour combiner effectivement la droite et les réactions en temps réel d'ACP, qui peuvent rapidement accomplir la détection quantitative des gènes. Le produit a la tolérance forte, la spécificité élevée et la stabilité. Le produit contient l'ADN polymérase unique de Foregene HotStar Taq de la société, qui a les avantages d'une amplification plus rapide (2Kb/min), d'une efficacité élevée d'amplification, d'une capacité spécifique forte d'amplification, et d'un bas taux de disparité comparé aux enzymes ordinaires de Taq. Il est employé ici pour que RT-PCR en temps réel réduise l'amplification non spécifique et pour améliore l'exactitude de l'ACP.

Caractéristiques

Le kit en une étape fait la transcription inverse et les réactions du qPCR deux dans le même tube, doivent seulement ajouter l'ARN de calibre, les amorces spécifiques d'ACP et le ddH2O sans RNase.

Le kit peut rapidement et efficacement quantitativement analyser l'ARN viral ou l'ARN de trace.

Le kit emploie un ADN polymérase unique de réactif de transcription d'inverse de Foregene et de Foregene HotStar Taq combiné avec un système de réaction unique pour améliorer effectivement l'efficacité d'amplification et la spécificité de la réaction.

Le système de réaction optimisé fait la réaction ont une sensibilité plus élevée de détection, une stabilité thermique plus forte, et une meilleure tolérance.

Droite-qPCR EasyTM (une étape) - kit du vert I de SYBR vient avec le colorant interne de référence de ROX, qui peut être employé pour éliminer le fond de signal et les erreurs de signal entre les puits, il est commode pour que les clients emploient que dans différents modèles des instruments quantitatifs d'ACP.

Kit Contents

Conditions de transport et de stockage

états 1.Transportation

Le processus entier du transport à basse température de glacière, pour s'assurer que le kit est dans un état de <4>

2. Conditions de stockage

• Le kit est stocké à -20℃. Stockez le produit dans un réfrigérateur de la température constante à -20℃ juste après le reçu. Si les conditions de stockage sont appropriées, le produit ne dégradera aucune représentation au cours de la période d'une année de validité.
• le composant de mélange-SYBR de 2×RT-qPCR EasyTM contient le vert I de SYBR, le gardent svp à partir de la lumière.

L'information composante de kit

Mélange-SYBR de 2× droite-qPCR EasyTM : Inverse Transcriptase, inhibiteur de RNase, ADN polymérase de Foregene HotStar Taq, rapport optimisé de Foregene des dNTPs, SYBR GreenI, Mg2+, stabilisateurs, renforceurs, et optimiseurs.

Colorant de référence de ROX : il est généralement employé sur les amplificateurs en temps réel d'ACP des sociétés tels qu'ABI et Stratagene pour ajuster la différence entre les tubes d'ACP et les tubes provoqués par des erreurs de chargement d'échantillon d'ACP. La concentration du colorant de référence de ROX exigé par différents instruments est différente, et l'utilisateur peut l'ajouter selon la concentration recommandée de l'instrument.

Précautions : (Lisez svp les précautions soigneusement avant d'employer le kit)

Les réactifs devraient éviter la congélation répétée et le dégel, autrement la représentation des réactifs diminuera ou deviendra invalide.

Les réactifs dans le kit devraient être protégés contre la lumière et être stockés à -20°C.

On lui recommande d'employer l'extraction témoin ou l'ARN fraîche de calibre stocké à -80°C (l'ARN devrait éviter la congélation répétée et le dégel).

Afin d'éviter la contamination de RNase, exécutez svp l'expérience dans l'espace sans RNase ; les astuces de pipette et les tubes d'ACP utilisés doivent être sans RNase ; et portez les gants jetables et les masques.

Ce kit doit être employé avec les amorces spécifiques pour des expériences. Veuillez choisir les amorces spécifiques pour que le gène soit amplifié selon les besoins de l'expérience.

Avant emploi, mélange-SYBR mis I de 2×RT-qPCR EasyTM sur la glace complètement à la fonte, chiquenaude et mélange bien avant l'utilisation ; la préparation du système devrait être actionnée sur un bain de glace pour améliorer la représentation du kit et pour augmenter l'amplification d'ACP la spécificité.

le mélange-SYBR de 2×RT-qPCR EasyTM contient le vert I de SYBR, évitent svp la lumière forte.

Concentration en ARN de calibre

Droite-qPCR EasyTM (une étape) - vert I de SYBR : (système)/20μl d'ARN de total 0.1pg-100ng.

Guide d'opération

: Préparation des matériaux et des réactifs

1. Préparez le calibre préparé d'ARN (on lui recommande d'employer des kits de série de kit d'isolement d'ARN de total de Foregene pour extraire et purifier l'ARN), les amorces spécifiques (10μM) et les consommables et les instruments relatifs.

Note : Veuillez assurer l'intégrité de l'ARN et essayez d'employer l'ARN extrait à partir des échantillons frais.

2. Mélange-SYBR mis de 2×RT-qPCR EasyTM, colorant sans RNase de la référence ddH2O, et 50×ROX (s'il y a lieu) sur la glace pour le laisser fondre naturellement, et effleurer le mur de tube pour se mélanger jusqu'à l'utilisation.

B : Préparation du système droite-qPCR

Le mélange-SYBR de 2× droite-qPCR EasyTM est commode et rapide pour employer, et évite la pollution lors du fonctionnement et les erreurs expérimentales provoquées par les préparations multiples du système de réaction dans la plus large mesure possible. En utilisant, seulement la moitié du volume du système de réaction (par exemple, si le système de réaction est 20μl, solution de mélange-SYBR de prise 10μl 2×RT-qPCR EasyTM), ajoutent le calibre d'ARN et les amorces spécifiques, et ajoutent ddH2O sans RNase pour composer le volume. Référez-vous au tableau 1 ci-dessous pour la préparation spécifique de système de réaction droite-qPCR

Forme 1 : Préparation du système droite-qPCR

1* : Habituellement la concentration finale de l'amorce est 0.2-0.25μM pour obtenir de meilleurs résultats. Quand la performance de réaction est pauvre, la concentration en amorce peut être ajustée dans la marge de 0.1-0.5μM.

Note : L'amorce en avant et l'amorce inverse sont les amorces spécifiques pour le gène de cible.

2* : Choisissez la concentration finale appropriée du colorant de référence de ROX selon différents instruments quantitatifs d'ACP. La concentration optimale du colorant de référence de ROX pour les machines quantitatives communes d'ACP est montrée dans la table suivante :

C : Arrangement de système de réaction droite-qPCR

• Après avoir préparé le système droite-qPCR référence étant faite à la table ci-dessus, mélange doucement (vous pouvez employer une astuce de pipette doucement à la pipette ; vous pouvez également vous mélanger sur un vortexer et une centrifugeuse brièvement pour rassembler le liquide dispersé sur le mur de tube ou le chapeau de tube, et un endroit sur la glacière pour une utilisation ultérieure).

2. Référez-vous aux arrangements de programme de la réaction droite-qPCR (tableau 2) pour placer la température et le temps de la réaction.

Note : Afin d'assurer l'activité du mélange-SYBR de 2×RT-qPCR EasyTM et améliorer son efficacité d'amplification, il est le meilleur de préparer le système de réaction droite-qPCR après l'installation du programme d'instrument d'ACP, de sorte que le programme de réaction puisse être suivi juste après que la préparation de système est accomplie.

3. Afin d'obtenir le meilleur effet de qPCR, l'ACP de gradient peut être employé pour optimiser les conditions de réaction pour différents calibres et différentes amorces.

Note : La température ambiante d'extension de l'ADN polymérase de Foregene Hotstar Taq a fourni dans ce kit est : 60-72℃, et la meilleure température d'extension est 72℃.

Ce qui suit est un exemple des états de la réaction droite-qPCR. On lui recommande d'employer une méthode en deux étapes pour la réaction d'ACP. Quand la concentration de calibre est si basse pour causer l'amplification non spécifique, la valeur basse du TM d'amorce mène à la basse efficacité d'amplification ou répétabilité pauvre de courbe d'amplification, etc., on lui recommande d'essayer la méthode en trois étapes pour la réaction d'ACP. Référez-vous au tableau 2-1 (méthode en deux étapes) et au tableau 2-2 (méthode en trois étapes) pour l'arrangement des états de la réaction droite-qPCR.

Forme 2-1 : Établissement de programme de la réaction droite-qPCR (pas de deux)

Forme 2-2 : Établissement de programme de la réaction droite-qPCR (en trois étapes)

1* : Le temps inverse de transcription peut être ajusté selon les besoins expérimentaux. Les gènes endogènes généraux tels que la β-actine ont besoin seulement de 10 minutes ; pour détecter les gènes exprimés spécifiques, le temps inverse de transcription peut être convenablement prolongé comme nécessaire.

2* : Placez un instant spécifique selon la longueur du fragment amplifié de cible. La vitesse d'amplification de l'ADN polymérase de Foregene HotStar Taq est 2kb/min.

Note : Les états de réaction d'ACP varient selon les conditions structurelles du calibre, des amorces, etc. Pour des calibres d'ARN avec les structures secondaires complexes, on lui recommande d'employer 42℃ pour la première étape de la transcription inverse. Dans l'opération spécifique, il est nécessaire de concevoir les conditions optimaux de réaction selon les conditions spécifiques telles que la taille du fragment de cible, la séquence de bases du fragment amplifié et la teneur en CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE et la longueur de l'amorce, y compris la température, le temps d'extension, etc. de recuit.

Diagramme d'opération