Pas de deux Cat.No.RT - kits principaux de RT-PCR EasyTM II de 02021/02022 du pas de deux droite d'ACP ACP de mélange

RT-PCR EasyTM II (pas de deux) Cat.No.RT - kits principaux de 02021/02022 du pas de deux RT-PCR ACP de mélange

RT-PCR EasyTM II (pas de deux)

Cat.No.RT - 02021/02022

Mélange principal en deux étapes de RT-PCR

RT-PCR EasyTM II (pas de deux)

Cat.No.RT - 02021/02022

Mélange principal en deux étapes de RT-PCR

Pour l'usage de recherches seulement

Magasin à -20℃

Lancement de produit

RT-PCR EasyTM II (pas de deux) contient tous les réactifs pour RT-PCR en deux étapes, combinant la réaction de droite et la réaction d'ACP dans le même kit, fournissant le mélange optimisé de droite et le mélange d'ACP. Le mélange unique de droite peut synthétiser le cDNA de haute qualité de premier-brin facilement et efficacement. 2× le plus de mélange de l'ACP EasyTM a l'amplification à haute efficacité et spécifique. La combinaison organique des deux rend la détection du gène de cible plus sensible.

Caractéristiques

L'analyse quantitative en temps réel de l'ARN peut être effectuée rapidement et exactement.

Le kit emploie un ADN polymérase unique de réactif de transcription d'inverse de Foregene et de Foregene HotStar Taq combiné avec un système de réaction unique pour améliorer effectivement l'efficacité d'amplification et la spécificité de la réaction.

Le système de réaction optimisé fait la réaction ont une sensibilité plus élevée de détection, une stabilité thermique plus forte, et une meilleure tolérance.

Kit Contents

Conditions de transport et de stockage

1. États de transport

Le processus entier du transport à basse température de glacière, pour s'assurer que le kit est dans un état de <4>

2. Conditions de stockage

Stocké à -20°C. stockez le produit dans un réfrigérateur de la température constante à -20°C juste après le reçu. Si les conditions de stockage sont appropriées, le produit ne dégradera aucune représentation au cours de la période d'une année de validité.

L'information composante de kit

Mélange de 2× droite EasyTM : Inverse Transcriptase de Foregene, inhibiteur de RNase, dNTPs, tampon de réaction, optimiseur et stabilisateur, etc.

2× plus de mélange de l'ACP EasyTM : ADN polymérase de Foregene Taq, dNTPs, Mg2+, tampon de réaction, optimiseur et stabilisateur.

Précautions : (Lisez svp les précautions soigneusement avant d'employer le kit)

Les réactifs devraient éviter la congélation répétée et le dégel, autrement la représentation des réactifs diminuera ou deviendra invalide.

Pour des calibres, on lui recommande d'employer l'ARN extrait à partir des échantillons frais ou stocké à -80℃ (l'ARN devrait éviter la congélation répétée et le dégel).

Afin d'éviter la contamination de RNase, l'opération d'expérience devrait être effectuée dans l'espace sans RNase ; les astuces de pipette et des tubes à centrifuger d'ACP utilisés doivent être sans RNase ; et des gants jetables et les masques devraient être portés.

Ce kit doit être employé avec les amorces spécifiques pour des expériences. Veuillez choisir les amorces spécifiques pour que le gène soit amplifié selon les besoins de l'expérience.

Avant emploi, mélange mis de 2×RT EasyTM et plus de mélange de 2×PCR EasyTM sur la glace complètement à la fonte, à la chiquenaude et au mélange bien avant l'utilisation ; la préparation du système devrait être actionnée sur un bain de glace pour améliorer la représentation du kit et pour améliorer la spécificité de l'amplification d'ACP.

Précautions : (Lisez svp les précautions soigneusement avant d'employer le kit)

- Les réactifs devraient éviter la congélation répétée et le dégel, autrement la représentation des réactifs diminuera ou deviendra invalide.

- Pour des calibres, on lui recommande d'employer l'ARN extrait à partir des échantillons frais ou stocké à -80℃ (l'ARN devrait éviter la congélation répétée et le dégel).

- Afin d'éviter la contamination de RNase, l'opération d'expérience devrait être effectuée dans l'espace sans RNase ; les astuces de pipette et des tubes à centrifuger d'ACP utilisés doivent être sans RNase ; et des gants jetables et les masques devraient être portés.

- Ce kit doit être employé avec les amorces spécifiques pour des expériences. Veuillez choisir les amorces spécifiques pour que le gène soit amplifié selon les besoins de l'expérience.

- Avant emploi, mélange mis de 2×RT EasyTM et plus de mélange de 2×PCR EasyTM sur la glace complètement à la fonte, à la chiquenaude et au mélange bien avant l'utilisation ; la préparation du système devrait être actionnée sur un bain de glace pour améliorer la représentation du kit et pour améliorer la spécificité de l'amplification d'ACP.

Concentration en ARN de calibre

RT-PCR EasyTM II (pas de deux) : (système)/20μl d'ARN de total 0.1pg-5μg

Guide d'opération

A-1 : Préparation des matériaux et des réactifs

1. Préparez le calibre préparé d'ARN (on lui recommande d'employer des kits de série de kit d'isolement d'ARN de total de Foregene pour extraire et purifier l'ARN), les amorces spécifiques (10μM) et les consommables et les instruments relatifs.

Note : Veuillez assurer l'intégrité de l'ARN et essayez d'employer l'ARN extrait à partir des échantillons frais.

2. Le mélange mis de 2×RT EasyTM et les ddH2O sans RNase sur un bain de glace pour le laisser fondre naturellement, et effleurent le mur de tube pour se mélanger bien pour une utilisation ultérieure.

A-2 : Préparation de système de droite

Il est commode et rapide employer mélange de 2× droite EasyTM, évitant la pollution lors du fonctionnement et les erreurs expérimentales provoquées par les préparations multiples du système de réaction dans la plus large mesure possible. En utilisant, juste prenez la moitié du volume du système de réaction (par exemple, si le système de réaction est 20μl, solution de mélange de prise 10μl 2×RT EasyTM), ajoutez le calibre d'ARN et les amorces inverses de transcription, et ajoutez ddH2O sans RNase pour composer le volume à 20μl. La préparation spécifique de système de réaction de droite peut se rapporter pour ajourner 1 ci-dessous.

Forme 1 : Préparation de système de droite

A-3 : Établissement de programme de réaction de droite

1. Après avoir préparé le système de droite référence étant faite à la table ci-dessus, mélange doucement (vous pouvez employer une astuce de pipette pour souffler doucement ; vous pouvez également la mélanger sur le vortexer et la centrifuger pour rassembler le liquide dispersé sur le mur de tube ou le chapeau de tube, et le placez dans prêt à employer sur la glacière).

2. Référez-vous aux arrangements de programme de réaction de droite (tableau 2) pour placer la température de réaction, l'heure, etc.

Note : Afin d'assurer l'activité du mélange et améliorer son efficacité d'amplification, il est le meilleur de préparer le système de réaction de droite après le bain en métal atteint la température réglée de réaction (la température inverse 42℃ ou 50℃ de transcription), de sorte que le système puisse être préparé juste après l'achèvement de la préparation de système. Suivez le programme de réaction. La réaction de droite peut également être exécutée sur une machine d'ACP.

Forme 2 : Établissement de programme de réaction de droite

Note : À l'aide de l'amorce aléatoire, la réaction devrait être préchauffée à 25℃ pour 10min avant la première étape de la réaction. La procédure ci-dessus est pour la référence seulement. Les conditions réels de réaction varient selon les conditions structurelles du calibre, des amorces, etc. Pour des calibres d'ARN avec des résultats secondaires complexes, la première température de réaction est recommandée pour être 50℃.

1. Le produit de réaction peut être directement employé dans les essais suivants, ou être stocké à -20°C pendant jusqu'à une semaine. Pour l'entreposage à long terme, on lui recommande d'éviter la congélation répétée et le dégel à -80°C.

B : Réaction d'identification d'ACP

B-1 : Préparation de système de réaction d'ACP

Employez le cDNA a synthétisé dans l'étape A comme calibre, et exécute la réaction d'ACP avec le plus de mélange de 2×PCR EasyTM fourni dans le kit. Plus de mélange de l'endroit 2×PCR EasyTM, cDNA, et ddH2O sans RNase sur un bain de glace pour le laisser fondre naturellement, et effleurer le mur de tube pour se mélanger jusqu'à l'utilisation. Pour la préparation spécifique de système d'ACP, référez-vous au tableau 3 ci-dessous.

Forme 3 : 反应体系配制 de préparation de système de réaction d'ACP

1* : Habituellement la concentration finale de l'amorce est 0.2-0.25μM pour obtenir de meilleurs résultats. Quand la performance de réaction est pauvre, la concentration en amorce peut être ajustée dans la marge de 0.1-0.5μM.

B-2 : Arrangement d'état de réaction d'ACP

1. Après avoir préparé le système d'ACP référence étant faite à la table ci-dessus, mélange doucement (vous pouvez employer une astuce de pipette pour souffler doucement ; vous pouvez également la mélanger sur le vortexer et la centrifuger pour rassembler le liquide dispersé sur le mur de tube ou le chapeau de tube, et le placez dans prêt à employer sur la glacière).

2. Référez-vous aux arrangements de programme de réaction d'ACP (tableau 4) pour placer la température et le temps de la réaction.

Note : Afin d'assurer l'activité du mélange d'ACP et améliorer son efficacité d'amplification, il est le meilleur de placer les conditions d'ACP sur la machine d'ACP avant de préparer le système d'ACP.

Forme 4 : Arrangement d'état de réaction d'ACP

1* : Placez un instant spécifique selon la longueur du fragment amplifié de cible. La vitesse d'amplification de l'ADN polymérase de Foregene Taq est 2kb/min.

Note : Les états de réaction d'ACP varient selon les conditions structurelles du calibre, des amorces, etc. Pour des calibres d'ARN avec les structures secondaires complexes, on lui recommande que la température de réaction pour la première étape de la transcription inverse soit 50°C. Dans des opérations spécifiques, il est nécessaire de concevoir les conditions optimales de réaction, y compris la température, temps d'extension, etc. de recuit, selon des conditions spécifiques telles que la taille du fragment de cible, la séquence de bases du fragment amplifié, et la teneur en CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE et la longueur de l'amorce.

Diagramme d'opération de RT-PCR