RT-QPCR EasyTM (une étape) - Taqman Cat.No.RT - 02131/02132 mélange principal en temps réel en une étape de RT-PCR

Cat.No.RT - 02131/02132

Mélange principal en temps réel en une étape de RT-PCR

RT-PCR EasyTM I (une étape)

Cat.No.RT - 02011/02012

Mélange principal en une étape de RT-PCR

Pour l'usage de recherches seulement

Magasin à -20℃

Lancement de produit

Les produits en une étape de série de Foregene RT-PCR EasyTM réalisent que la réaction intégrée de l'ARN à l'ADN bicaténaire, c.-à-d., renversent la transcription et amplification d'ACP sont accomplis dans le même tube à centrifuger de réaction et le même système de réaction, qui simplifie les étapes expérimentales, optimise le programme expérimental, et améliore l'efficacité d'expérience.

Droite-qPCR EasyTM (une étape) - Taqman utilisant l'ADN polymérase de Foregene HotStar Taq, le système optimisé de qPCR de Taqman peut rapidement et spécifiquement effectuer la détection droite-qPCR quantitative en temps réel des calibres d'ARN de trace.

Caractéristiques

- Le kit en une étape permet la transcription inverse et l'ACP à effectuer dans le même tube, doit seulement ajouter l'ARN de calibre, les amorces spécifiques d'ACP et le ddH2O sans RNase.

- L'analyse quantitative en temps réel de l'ARN viral ou de l'ARN de trace peut être effectuée rapidement et exactement.

- Le kit emploie un ADN polymérase unique de réactif de transcription d'inverse de Foregene et de Foregene HotStar Taq combiné avec un système de réaction unique pour améliorer effectivement l'efficacité d'amplification et la spécificité de la réaction.

- Le système de réaction optimisé fait la réaction ont une sensibilité plus élevée de détection, une stabilité thermique plus forte, et une meilleure tolérance.

- Droite-qPCR EasyTM (une étape) - kit de Taqman vient avec le colorant interne de référence de ROX, qui peut être employé pour éliminer le fond de signal et les erreurs de signal entre les puits, il est commode pour que les utilisateurs emploient que dans différents modèles des instruments quantitatifs d'ACP

Le contrôle de la qualité du produit

Selon le système total de la gestion de la qualité de FOREGEN (système total de la gestion de la qualité de FOREGENE), chaque série de kits de RT-PCR EasyTM I (une étape) sont strictement examinées des périodes multiples d'assurer la qualité, la fiabilité et la stabilité de chaque groupe de kits.

Kit Contents

Conditions de transport et de stockage

états 1.Transportation

Le processus entier du transport à basse température de glacière, pour s'assurer que le kit est dans un état de <4>

2. Conditions de stockage

Droite EasyTM j'est stocké à -20°C. stocke le produit dans un réfrigérateur de la température constante à -20°C juste après le reçu. Si les conditions de stockage sont appropriées, le produit ne dégradera aucune représentation au cours de la période d'une année de validité.

L'information composante de kit

Mélange de 2× RT-PCR EasyTM : Inverse Transcriptase de Foregene, ADN polymérase d'inhibiteur de RNase, de Foregene HotStar Taq, dNTPs, Mg2+, tampon de réaction, optimiseur et stabilisateur, etc.

Précautions : (Lisez svp les précautions soigneusement avant d'employer le kit)

Pour des calibres, on lui recommande d'employer l'ARN extrait à partir des échantillons frais ou stocké à -80℃ (l'ARN devrait éviter la congélation répétée et le dégel).

Afin d'éviter la contamination de RNase, l'opération d'expérience devrait être effectuée dans l'espace sans RNase ; les astuces de pipette et des tubes à centrifuger d'ACP utilisés doivent être sans RNase ; et des gants jetables et les masques devraient être portés. Avant emploi, mettez le mélange de 2×RT-PCR EasyTM sur la glace complètement à la fonte, à la chiquenaude et au mélange bien avant l'utilisation ; la préparation du système devrait être actionnée sur un bain de glace pour améliorer la représentation du kit et la spécificité de l'amplification d'ACP.

Concentration en ARN de calibre

RT-PCR EasyTM I (une étape) : (système)/20μl d'ARN de total 0.1pg-1μg

Kit Application

- Ce kit est employé pour la détection rapide de la haut-copie et des gènes de bas-copie.

- Il est particulièrement approprié à la détection rapide des calibres d'ARN avec la structure secondaire satisfaite ou complexe élevée de CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE.

Le contrôle de la qualité du produit

Selon le système total de la gestion de la qualité de FOREGEN (système total de la gestion de la qualité de FOREGENE), chaque série de kits de RT-PCR EasyTM I (une étape) sont strictement examinées des périodes multiples d'assurer la qualité, la fiabilité et la stabilité de chaque groupe de kits.

Guide d'opération

: Préparation des matériaux et des réactifs

1. Préparez le calibre préparé d'ARN (on lui recommande d'employer des kits de série de kit d'isolement d'ARN de total de Foregene pour extraire et purifier l'ARN), les amorces spécifiques (10μM) et les consommables et les instruments relatifs.

Note : Veuillez assurer l'intégrité de l'ARN et essayez d'employer l'ARN extrait à partir des échantillons frais.

2. Le mélange de l'endroit 2× RT-PCR EasyTM et les ddH2O sans RNase sur un bain de glace pour le laisser fondre naturellement, et effleurent le mur de tube pour se mélanger bien pour une utilisation ultérieure.

B : Préparation de système de RT-PCR

Il est commode et rapide employer mélange de 2×RT-PCR EasyTM, évitant la pollution lors du fonctionnement et les erreurs expérimentales provoquées par les préparations multiples du système de réaction dans la plus large mesure possible. En utilisant, seulement la moitié du volume du système de réaction (par exemple, si le système de réaction est 20μl, solution de mélange de prise 10μl 2×RT-PCR EasyTM), ajoutent la quantité appropriée de calibre d'ARN et d'amorces spécifiques, et ajoutent ddH2O sans RNase pour composer le volume. Référez-vous au tableau 1 ci-dessous pour la préparation spécifique de système de réaction de RT-PCR.

Forme 1 : Préparation de système de RT-PCR

1* : Habituellement la concentration finale de l'amorce est 0.2-0.25μM pour obtenir de meilleurs résultats. Quand la performance de réaction est pauvre, la concentration en amorce peut être ajustée dans la marge de 0.1-0.5μM.

Note : L'amorce en avant et l'amorce inverse sont les amorces spécifiques pour le gène de cible ; le système 50μl, se rapportent svp au système 20μl pour ajuster le dosage de réactif proportionnellement.

C : Établissement de programme de réaction de RT-PCR

• Après avoir préparé le système de RT-PCR référence étant faite à la table ci-dessus, mélange doucement (vous pouvez employer l'astuce de pipette pour souffler doucement ; vous pouvez également vous mélanger sur un vortexer et une centrifugeuse brièvement pour rassembler le liquide dispersé sur le mur de tube ou le chapeau de tube, et un endroit sur la glacière pour une utilisation ultérieure).

2. Référez-vous aux arrangements de programme de réaction de RT-PCR (tableau 2) pour placer la température et le temps de la réaction.

Note : Afin d'assurer l'activité du mélange de 2×RT-PCR EasyTM et améliorer son efficacité d'amplification, il est le meilleur de préparer le système de réaction de RT-PCR après établissement du programme d'instrument d'ACP, de sorte que le programme de réaction puisse être suivi juste après que le système est préparé.

Forme 2 : Arrangement de système de réaction de RT-PCR

Note : La procédure ci-dessus est pour la référence seulement. Les conditions réels de réaction varient selon les conditions structurelles du calibre, des amorces, etc. Pour des calibres d'ARN avec les structures secondaires complexes, la température de réaction pour la première étape de la transcription inverse est recommandée pour être 50°C. Dans l'opération spécifique, il est nécessaire de concevoir les conditions optimales de réaction, y compris la température de recuit, temps d'extension, etc. selon les conditions spécifiques de la taille de fragment de cible, la séquence de bases du fragment amplifié, et la teneur en CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE et la longueur de l'amorce.
Diagramme d'opération de RT-PCR

Inverse Transcriptase de Foregene

Le transcriptase d'inverse de Foregene peut fournir la réaction inverse très efficace et spécifique de transcription. Le transcriptase inverse montre l'affinité élevée et maintient toujours la bonne activité inverse de transcription à une température de réaction de 50°C. Il peut bien s'inverser transcrivent l'ARN avec la structure secondaire complexe que d'autres transcriptases inverses ne peuvent pas traiter. L'inverse Transcriptase de Foregene a la sensibilité élevée et s'applique dans un large éventail de montants d'ARN (0.1pg≤RNA≤1μg).

ADN polymérase de Foregene HotStar Taq

Fournit une amplification fortement spécifique d'ACP. Quand la transcription inverse est en cours, l'ADN polymérase est complètement inefficace et ne gêne pas la réaction inverse de transcription. Après le programme de réaction d'ACP, de chauffage à 94°C, l'ADN polymérase est activé et le transcriptase inverse est inactivé. Le procédé de chaud-commencement élimine la formation des amorces et des dimères de recuit non spécifiques d'amorce dans le premier cycle, assurant la spécificité et la fiabilité élevées de l'amplification d'ACP.

Précaution : (Lisez svp les précautions soigneusement avant d'employer le kit)

- Les réactifs devraient éviter la congélation répétée et le dégel, autrement la représentation des réactifs diminuera ou deviendra invalide.

- On lui recommande d'employer l'extraction témoin ou l'ARN fraîche de calibre stocké à -80℃ (l'ARN devrait éviter la congélation répétée et le dégel).

- Afin d'éviter la contamination de RNase, l'opération d'expérience devrait être effectuée dans l'espace sans RNase ; les astuces de pipette et les tubes d'ACP utilisés doivent être sans RNase ; et des gants jetables et les masques devraient être portés.

- Ce kit doit être employé avec les amorces spécifiques pour des expériences. Veuillez choisir les amorces spécifiques pour que le gène soit amplifié selon les besoins de l'expérience.

- Avant emploi, mettez le mélange de 2× RT-PCR EasyTM sur la glace complètement à la fonte, à la chiquenaude et au mélange bien avant l'utilisation ; la préparation du système devrait être actionnée sur un bain de glace pour améliorer la représentation du kit et la spécificité de l'amplification d'ACP.

- Bain de glace

réactifs Auto-préparés

- Calibre d'ARN

- Amorces spécifiques d'ACP de gène

Sécurité

       - Ce produit est pour l'usage de recherches scientifiques seulement, svp ne l'emploie pas en médecine, médecine clinique, nourriture et cosmétiques.

       - Vêtements appropriés de laboratoire d'usage, gants, verres protecteurs, etc. en employant des produits chimiques.

Le contrôle négatif a la valeur trop élevée de fluorescence

1. La contamination de réactif a causé lors du fonctionnement.

Recommandation : Remplacez par de nouveaux réactifs pour des expériences de RT-PCR.

2. La contamination s'est produite pendant la préparation du système de réaction d'ACP. Recommandation : Prenez les mesures de sauvegarde nécessaires lors du fonctionnement, comme : gants de port de latex, utilisant une astuce de pipette avec un filtre, etc.

3. Les amorces sont dégradées, et la dégradation des amorces mènera à l'amplification non spécifique.

Suggestion : Employez l'électrophorèse de SDS-PAGE pour détecter si les amorces sont dégradées, et remplacez-les par de nouvelles amorces pour des expériences de RT-PCR.

Répétabilité pauvre des valeurs quantitatives

1. L'instrument fonctionne mal.

Suggestion : Il peut y avoir des erreurs entre chaque trou d'ACP de la machine d'ACP, ayant pour résultat la reproductibilité pauvre pendant la gestion ou la détection de la température.

Veuillez effectuer l'essai selon les instructions de l'instrument correspondant.

2. La pureté d'échantillon n'est pas bonne.

Recommandation : Les échantillons impurs mèneront à la reproductibilité pauvre de l'expérience, qui inclut la pureté du calibre et des amorces. Il est le meilleur de repurify le calibre, et les amorces mieux sont épurées par SDS-PAGE.

3. Le temps de préparation et d'entreposage de système d'ACP est trop long.

Suggestion : Employez le système de RT-PCR pour des expériences d'ACP juste après la préparation, et ne le laissez pas trop longtemps ; on lui recommande d'installer le programme d'ACP avant de commencer avec la préparation de système de RT-PCR.

4. Les conditions d'amplification d'ACP ne sont pas appropriés, et l'ordre ou la concentration d'amorce est inexacte.

Suggestion : confirmez l'exactitude de l'ordre d'amorce et l'amorce n'a pas été dégradée ; quand le signal d'amplification n'est pas bon, essayez d'ajuster la température de recuit et d'ajuster la concentration en amorce convenablement.