Kit DE-05011/05012/05013 d'isolement d'ADN de tissu animal pour la purification Genomic d'ADN

Isolement Kit Cat d'ADN de tissu animal. No.DE-05011/05012/05013 pour la purification Genomic d'ADN des cellules cultivées et de l'animal

Kit d'isolement d'ADN de tissu animal

Cat.No.DE - 05011/05012/05013

Pour la purification genomic d'ADN des tissus de cellule et animaux cultivés

Produit Descprition :

Ce kit emploie une colonne réservée à l'ADN qui peut spécifiquement lier l'ADN, la protéase de Foregene et un système unique de tampon. L'ADN genomic de haute qualité peut être extraite à partir de divers tissus cultivés de cellule et animaux dans un délai de 30 à 50 minutes.

La membrane réservée à l'ADN de silicagel utilisée dans la colonne de rotation est matériel unique de Foregene le nouveau, qui peut effectivement et spécifiquement lier à l'ADN, et maximise le retrait de l'ARN, des protéines d'impureté, des ions et d'autres composés organiques en cellules. ADN 5-80μg genomic de haute qualité peut être purifiée du tissu 10-50mg.

Composants de produit :

Features&advantages :

- Aucune contamination de RNase : La colonne réservée à l'ADN a fourni dans le kit permet pour éliminer l'ARN de l'ADN genomic sans RNase supplémentaire pendant l'expérience, empêchant de ce fait le laboratoire d'être souillée par la RNase exogène.

- Vitesse rapide : La protéase de Foregene a plus de forte activité les prélèvements de tissu que semblables de protéases et de résumés plus rapides ;

- Simple : l'opération genomic de purification d'ADN peut être accomplie en 50 minutes.

- Commode : La centrifugation est effectuée à la température ambiante, la centrifugation 4℃ et la précipitation d'éthanol de l'ADN n'est pas exigée.

- Sécurité : aucun réactif organique n'est employé.

qualité à hauteur : L'ADN genomic purifiée a de grands fragments, aucun ARN, aucune RNase, et extrêmement - le bas contenu d'ion, qui peut répondre aux exigences de diverses expériences.

Applications de l'ADN genomic :

L'ADN genomic a épuré par le kit d'isolement d'ADN de tissu animal a la grande pureté et peut être employée pour des opérations courantes de biologie moléculaire, comme : digestion d'enzymes, ACP, hybridation du sud, construction de bibliothèque et d'autres expériences.

Contrôle de qualité de produit :

Selon le système total de la gestion de la qualité de FOREGENE, chaque série de kits d'isolement d'ADN de tissu animal sont strictement examinées des périodes multiples d'assurer la fiabilité et la stabilité de la qualité de chaque série de kits.

Rendement et pureté Genomic d'extraction d'ADN :

Le rendement d'extraction d'ADN genomic de tissu animal est lié à la source de tissu, aux conditions de stockage, au temps d'entreposage, au dosage et à d'autres facteurs. La pureté de l'ADN genomic obtenue rencontre l'opération expérimentale de biologie moléculaire courante, et son OD260/280 est entre 1.7-1.9. Le rendement d'ADN genomic extrait utilisant ce kit est montré dans la table suivante :

Précautions : (Svp être sûr de lire les précautions soigneusement avant d'employer le kit)

- L'échantillon devrait éviter la congélation répétée et le dégel, autrement les fragments extraits d'ADN seront plus petits et le rendement d'extraction sera réduit.

- Avant d'employer le kit, pour vérifier soigneusement s'il y a de précipitation dans le tampon L1, le tampon L2 et le tampon picowatt. S'il y a de précipitation, dissolvez-svp la à 37℃, mélange bien avant l'utilisation.

- Avant d'employer le kit, soyez sûr de vérifier si le WB de tampon est ajouté avec de l'éthanol anhydre selon les instructions. Le WB de tampon a été ajouté avec de l'éthanol 60ml anhydre (DE-05011), l'éthanol 120ml anhydre (DE-05012) et l'éthanol 300ml anhydre (DE-053013) avant emploi.

- Volume d'élution : Le tampon eb ne devrait pas être moins que 100μl, autrement il affectera le rendement d'ADN.

- Rappelez-vous de ne pas ajouter la RNase à n'importe quel tampon.

- Toutes les étapes de centrifugation sont centrifugées à la température ambiante (15-25℃) utilisant une centrifugeuse de bureau.

- Toutes les étapes expérimentales ont été effectuées à la température ambiante (15-25℃).

Durée de conservation de stockage et :

- Le kit peut être stocké pour 12 mois à la température ambiante (15-25℃), ou 2-8℃ pendant un plus long temps.

Note : Si stocké à la basse température, la solution est à précipitation encline. Avant emploi, être sûr de placer la solution dans le kit à la température ambiante pendant une période. S'il y a lieu, préchauffez-le sur un bain d'eau 37℃ pendant 10 minutes pour dissoudre le précipité, et mélangez-le avant emploi.

- La solution de protéase de Foregene a une formule unique et est en activité pendant longtemps (3 mois) à la température ambiante ; son activité et stabilité seront meilleures quand stocké à 4℃, ainsi on lui recommande de le stocker à 4℃, se rappellent de ne pas le stocker aux économies de -20℃.

Caractères réservés à l'ADN de colonne

* : Le système minimum d'élution de 100μl est un volume recommandé raisonnable donné compte tenu du taux et de la concentration de récupération d'ADN. Si afin d'augmenter le rendement d'ADN, le volume de l'éluat peut être convenablement augmenté ; si afin d'augmenter la concentration de l'ADN purifiée, le volume de l'éluat peut être convenablement réduit sur les lieux de sacrifier une partie du rendement d'ADN, tel qu'employer un système de l'élution 50μl, afin d'obtenir des concentrations plus élevées de l'ADN.

Rendement et pureté Genomic d'extraction d'ADN

Le rendement d'extraction d'ADN genomic de tissu animal est lié à la source de tissu, aux conditions de stockage, au temps d'entreposage, au dosage et à d'autres facteurs. La pureté de l'ADN genomic obtenue rencontre l'opération expérimentale de biologie moléculaire courante, et son OD260/280 est entre 1.7-1.9. Le rendement d'ADN genomic extrait utilisant ce kit est montré dans la table suivante :

Note : Les données dans cette table sont pour la référence seulement. Dans l'opération réelle, les données obtenues seront légèrement différentes des données dans cette table due aux facteurs tels que des conditions de stockage et la compétence de fonctionnement des matières employées.

Déroulement des opérations

Guide d'analyse de problème

Ce qui suit est une analyse des problèmes qui peuvent être produits dans l'extraction de l'ADN genomic des prélèvements de tissu, espérant être utile à vos expériences. En outre, pour d'autres problèmes expérimentaux ou techniques autres que des instructions d'opération et l'analyse de problème, nous avons consacré le support technique pour vous aider. Si vous avez n'importe quels besoins, svp contactez-nous : 028-83360257 ou l'E-Mali : Tech@foregene.com.

Bas rendement ou aucune ADN

Il y a habituellement des facteurs multiples qui affectent le rendement d'ADN genomic, y compris la source d'échantillon, les conditions de stockage d'échantillon, le traitement préparatoire d'échantillon, la manipulation, etc.

L'ADN Genomic n'a pas pu être obtenue pendant l'extraction

1. Les prélèvements de tissu sont incorrectement stockés ou trop longtemps stockés, ayant pour résultat la dégradation de l'ADN genomic.

Recommandation : Prélèvements de tissu de magasin dans l'azote liquide ou le -80°C ; essayez d'employer les prélèvements de tissu nouvellement rassemblés pour l'extraction genomic d'ADN.

2. Trop peu de consommation de tissu peut mener au manque d'extraire l'ADN genomic correspondante.

Suggestion : Pour les prélèvements de tissu qui ont été stockés pendant longtemps ou ont la dégradation genomic grave d'ADN, la quantité de prélèvements de tissu peut être convenablement augmentée afin d'extraire l'ADN genomic considérable. La quantité d'échantillon peut être déterminée selon les besoins d'ADN, mais elle ne devrait pas dépasser 50mg.

3. Stockage inexact des résultats de protéase de Foregene dans l'activité réduite ou inactivée.

Recommandation : Confirmez les conditions de stockage de la protéase de Foregene ou remplacez-les par une nouvelle protéase de Foregene pour l'hydrolyse enzymatique.

4. Le kit est incorrectement stocké ou trop longtemps stocké, faisant échouer quelques composants dans le kit.

Recommandation : Achetez un nouveau kit genomic d'extraction d'ADN de tissu animal pour des opérations relatives.

5. Utilisation inexacte du kit. Par exemple, quelques tissus ont besoin des kits spéciaux pour le traitement.

Recommandation : L'achat d'un kit pour des échantillons, tels que l'extraction de l'ADN genomic de sol, exige acheter un kit consacré d'isolement d'ADN de sol.

6. WB de tampon sans ajouter l'éthanol anhydre.

Recommandation : Veillez à ajouter le volume correct d'éthanol anhydre pour protéger le WB.

7. L'éluant n'a pas été égoutté sur la membrane de silice correctement.

Suggestion : Ajoutez l'éluant préchauffé à 65°C goutte-à-goutte au milieu de la membrane de silicagel, et laissez-le à la température ambiante pendant 5 minutes pour augmenter l'efficacité d'élution.

ADN genomic extraite avec le bas rendement

1. L'échantillon est incorrectement stocké ou trop longtemps stocké, ayant pour résultat la dégradation de l'ADN genomic.

Recommandation : Prélèvements de tissu de magasin dans l'azote liquide ou -80 ; essayez d'employer les prélèvements de tissu nouvellement rassemblés pour l'extraction genomic d'ADN.

2. Si la quantité de prélèvements de tissu est trop petite, l'ADN genomic extraite sera moins.

Suggestion : Pour les prélèvements de tissu qui ont été stockés pendant longtemps ou ont la dégradation genomic grave d'ADN, la quantité de prélèvements de tissu peut être convenablement augmentée pour obtenir l'ADN genomic considérable. La quantité d'échantillon peut être déterminée selon les besoins d'ADN, mais elle ne devrait pas dépasser 50mg.

3. La quantité excessive d'échantillon mènera à la digestion inachevée et à la centrifugation inachevée. La colonne de purification peut être bloquée pendant la centrifugation sur la colonne, et l'ADN genomic extraite sera moins.

Suggestion : Selon différents tissus, le dosage devrait être ajusté à moins de mg 10-50. Quand la digestion est inachevée ou la colonne de purification est bloquée, réduisez svp le dosage correspondant de tissu.

4. L'échantillon n'est pas prétraité ou n'est pas prétraité incomplètement.

Suggestion : Des échantillons particulièrement préservés ou quelques échantillons relativement spéciaux doivent être traités préalablement avant l'hydrolyse enzymatique, qui peut enlever la solution de conservation d'échantillon ou des facteurs affectant l'activité de protéase, de sorte que la réaction enzymatique d'hydrolyse puisse être effectuée plus complètement, et l'ADN genomic de plus grand rendement puisse être obtenue.

5. Prélèvements de tissu préservés spéciaux, tels que la queue paraffine-enfoncé, de rat, etc.

Recommandation : Achetez un kit genomic consacré d'extraction d'ADN, tel que les échantillons paraffine-incorporés, vous peut choisir le kit d'isolement d'ADN de la FFPE ; des échantillons de queue de souris, vous pouvez choisir ADN Mini Kit de queue de souris. Ces tissus sont traités avec leurs kits spéciaux, et le rendement d'extraction d'ADN sera plus haut et l'effet sera plus idéal.

6. Stockage inexact des résultats de protéase de Foregene dans l'activité réduite ou inactivée.

Recommandation : Confirmez les conditions de stockage de la protéase de Foregene ou remplacez-les par une nouvelle protéase de Foregene pour l'hydrolyse enzymatique.

7. Le problème d'éluant.

Recommandation : Svp tampon eb d'utilisation pour l'élution ; si utilisant le ddH₂ O ou d'autres éluants, assurez-vous le pH de l'éluant est entre 7.0-8.5.

8. L'éluant n'a pas été ajouté goutte-à-goutte correctement.

Suggestion : Veuillez ajouter la baisse d'élution au milieu de la membrane de silice et laissez-la à la température ambiante pendant 5 minutes pour augmenter l'efficacité d'élution.

9. Le volume d'éluant est si bas.

Suggestion : Veuillez employer l'éluant pour l'élution genomic d'ADN selon les instructions, au moins pas moins que 100μl.

ADN genomic extraite avec à faible pureté

L'à faible pureté de l'ADN genomic mènera à l'échec ou à l'effet insatisfaisant des expériences en aval, comme : l'enzyme ne peut pas être coupée, et le fragment de gène de cible ne peut pas être obtenu par ACP.

1. Contamination diverse de protéine, contamination d'ARN.

Analyse : Le tampon picowatt n'a pas été utilisé pour laver la colonne ; Le tampon picowatt n'a pas été utilisé pour laver la colonne à la vitesse correcte de centrifugation.

Recommandation : Essayez de s'assurer qu'il n'y a aucune précipitation dans le surnageant quand le surnageant est passé par la colonne ; soyez sûr de laver la colonne de purification avec le tampon picowatt selon les instructions, et cette étape ne peut pas être omise.

2. Pollution d'ion d'impureté.

Analyse : La colonne de lavage de WB de tampon a été omise ou seulement lavée par le passé, ayant pour résultat la contamination ionique résiduelle.

Recommandation : Soyez sûr de laver deux fois avec le WB de tampon selon les instructions d'enlever les ions résiduels autant que possible.

3. Contamination de RNase.

Analyse : La RNase exogène est ajoutée au tampon ; résultats incorrects d'opération de lavage de picowatt de tampon en RNase résiduelle, qui affecte des opérations expérimentales d'ARN en aval, telles que la transcription in vitro.

Suggestion : Les kits acides nucléiques d'extraction de série de Foregene peuvent éliminer l'ARN sans RNase supplémentaire, et tous les réactifs chez le kit d'isolement d'ADN de tissu animal n'ont pas besoin de RNase ; soyez sûr de laver la colonne de purification avec le tampon picowatt selon les instructions, et cette étape ne peut pas être omise.

4. Résidus d'éthanol.

Analyse : Après lavage de la colonne de purification avec le WB de tampon, aucune centrifugation vide de tube n'a été effectuée.

Recommandation : Suivez les instructions pour la centrifugation vide appropriée de tube.

5. L'autre pollution d'impuretés.

Analyse : Des échantillons sauvés ou les échantillons spéciaux n'ont pas été prétraités.

Recommandation : Traitez préalablement complètement l'échantillon selon les consignes d'utilisation.