Kits inverses rapides et extrêmement sensibles droite II FACILE de transcription de réactif de laboratoire pour produire du cDNA de premier-brin
Application de kit
Directement utilisé pour l'analyse quantitative en temps réel d'ACP de l'expression du gène.
Peut rapidement et exactement analyser des traces d'ARN telles que des virus d'ARN.
Transcription inverse des calibres d'ARN avec la structure secondaire satisfaite ou complexe élevée de CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE.
Kit Component Information
2×RT ou-EasyTM mélange : Inverse Transcriptase de Foregene, inhibiteur de RNase, dNTPs, stabilisateur, renforceur, optimiseur et amorce inverse de transcription (amorce aléatoire, (décollement) amorce 18 Oligo) avec le rapport optimisé.
Tolérance de mélange de droite
Le 2×RT ou-EasyTM le mélange a montré une tolérance très élevée aux sels d'alcool et de guanidine après essai de l'analyse. L'ARN purifié dans le laboratoire a souvent des résidus des sels d'alcool et de guanidine, qui exercent un effet inhibiteur fort sur la transcription inverse, ayant pour résultat l'effet inverse insatisfaisant de transcription ou la basse efficacité inverse de transcription. La tolérance des produits faciles de série de Foregene droite aux sels d'alcool et de guanidine rend la transcription inverse plus facile et plus efficace.
Analyse de tolérance d'alcool
Analyse de tolérance de sel de guanidine
Préparation avant opération
On lui recommande vivement que les utilisateurs lisent les instructions soigneusement avant d'employer ce kit. Les kits faciles de série de droite il est facile utiliser, commode et rapide, et les instructions fournissent l'utilisation correcte du kit entier. Veuillez préparer les matériaux et l'équipement expérimentaux nécessaires avant emploi.
Quantité d'ARN de calibre
L'ARN de calibre devrait de préférence être extrait à partir des échantillons frais ou être stocké à -80°C (a répété la congélation et le dégel de l'ARN devrait être évité).
Droite EasyTM II : (ARN de total 0.1pg-0.5μg ou système)/10μl de 0.01pg-0.05μg ADN messagère.
Amplification non spécifique
1. Conception déraisonnable d'amorce.
Recommandation : Amorces de conception selon des conceptions de bases d'amorce.
2. Résidus Genomic.
Recommandations : Employez un kit inverse de transcription comme (chat. No. RH-01031) qui contient des amorces de transport-intron d'ablation ou de conception de génome.
RT-QPCR aucun signal d'amplification
1. L'ARN est dégradé.
Recommandation : Le matériel pour l'extraction d'ARN devrait être aussi frais comme possible, et l'ARN de haute qualité et de grande pureté devrait être employé.
2. L'ARN contient des inhibiteurs.
Recommandation : Les inhibiteurs inverses de transcription incluent généralement le SDS, les sels de guanidine, l'EDTA, etc. On lui recommande de laver le précipité d'ARN avec de l'éthanol de 70% pour enlever des inhibiteurs.
3. Questions de conception d'amorce.
Recommandation : Selon la conception de bases d'amorce, remodelez les amorces pour l'inspection.
La bande de cible apparaît dans le contrôle vide
1. Contamination des outils ou des réactifs fonctionnants.
Recommandation : Tous les réactifs ou équipement pour l'expérience devraient être stérilisés à l'autoclave. Soyez soigneux et doux empêcher des échantillons d'ADN d'être dessiné dans la pipette ou vous êtes renversé hors du tube à centrifuger.
2. La contamination s'est produite pendant la préparation de système de réaction d'ACP.
Recommandation : Prenez les précautions nécessaires en manipulant, par exemple : Gants de latex d'usage, astuces de filtre d'utilisation. Employez le mélange en temps réel d'ACP dans un système à l'épreuve des contaminations.
3. Les amorces sont dégradées.
Recommandation : Employez l'électrophorèse de SDS-PAGE pour détecter si les amorces sont dégradées, et la remplacez par de nouvelles amorces pour des expériences de détection de fluorescence.
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